Ekstraksi
gluten (gliadin) dengan EtOH 60%
Ekstraksi gluten dilakukan dengan menggunakan dua pelarut yang
berbeda yaitu etanol 60% dan fosfat buffer salin. Serbuk biscuit yang sudah halus ditimbang sebanyak 1gr
kemudian ditambahkan masing-masing 10 mL EtOH 60% dan fosfat buffer salin. Campuran divortex selama 2 menit dan disentrifugasi dengan kecepatan 3000
g x 10 menit. Supernatan yang diperoleh adalah gliadin dan yang fraksi padatnya adalah glutenin. Masing-masing disimpan pada suhu -20C hingga digunakan. (pelarut terbaik EtOH
60%).
Preparasi dan Injeksi Sampel
Sebanyak 20 μL
sampel dimasukkan ke dalam microtube
0,5 mL dan ditambahkan 40 μL
bufer sampel. Tabung kemudian dipanaskan selama 5 menit dalam air
mendidih 100°C. Sampel siap diinjeksikan ke dalam sumur menggunakan mikropipet.
Pada salah satu sumur, ditempatkan sebanyak 7 μL protein marker. Standar yang
digunakan adalah low molecular weight
protein (LMW) Fermentas® yang mengandung 7 jenis protein standar
yaitu β-galaktosidase (BM: 116 kDa), bovine
serum albumin (BM: 66,2 kDa), ovalbumin (BM: 45 kDa), laktase dehidrogenase
(BM: 35 kDa), REase BSP 981 (BM: 25 kDa), β-laktoglobulin (BM: 18,4 kDa), dan
lisozim (BM: 14,4 kDa).
Prosedur lain
Sama seperti biasa
Tidak ada komentar:
Posting Komentar